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Hybridization(혼성화) 방법과 응용분야
ttolie27 > 문서박스 > 식품영양학 | 2008/05/06 구매(1) ㅣ 조회(59)
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소개글 Hybridization(혼성화) 방법과 응용분야
목차 가. 혼성화란?
나. 혼성화의 방법
다. 혼성화의 응용분야
본문내용 가. 혼성화란?
분리된 외사슬들로부터 재생 DNA를 형성하는 기술을 혼성화(Hybridizayion)라고 한다. 이 재생기술은 니트로셀룰로오스로 제조된 얇은 막필터상에서도 시행할수 있다. 이는 니트로셀룰로오스가 외사슬 DNA와는 매우 단단하게 결합하지만 이중나선 DNA 혹은 RNA와는 잘 결합하지 못하기 때문이다. 이 특성이 혼성화를 측정하는 핵심이 된다.

나. 혼성화의 방법
혼성화반응은 예비혼성화 반응과 혼성화반응의 2단계로 이루어진다.

㉠예비혼성화 반응
막의 크기에 맞는 양의 예비 혼성화 반응 용액을 넣고 막이 용액에 완전히 적셔지도록 한 다음 42℃, 2~3시간 반응시킨다.
㉡혼성화 반응
예비 혼성화 반응 용액을 버린다. 혼성화 반응 용액에 끓는 물중에서 변성시킨 후 급냉한 탐침을 첨가한 다음 막에 부어준다.
1~2시간 반응시킨 다음 100℃로 가열한 탐침을 첨가하여 잘 혼합하고 65℃에서 하룻밤 혼성화 반응시킨다. 혼성화 반응 용액 중 덱스트란 설페이트는 혼성체 형성속도를 증가시키는 목적으로 또 Denhardt 용액이나 청어 정자 DNA는 백그라운드를 낮게 억제하는 목적으로 첨가하고 있다. 혼성화 반응에서 온도는 매우 중요한 조건으로 탐침의 융해온도(Tm)는 탐침과 상보적 배열인 혼성체의 50%가 해리하는 온도이다. 20~25기의 올리고누클레오티드의 경우 Tm은 다음 식으로 결정할수 있다.
이 Tm치에서 5~10℃ 낮은 온도가 혼성화 반응온도로 이용된다. 이 식에 나타낸 것처럼 혼성화 반응 용액 중 포름아미드는 Tm을 낮추는 작용을 하고 있다.
㉢세정
막을 0.1% SDS + 1 * SSC 용액으로 실온에서 20분간 세정한 후, 0.1% SDS +0.2 * SSC 용액으로 68℃, 20분간 3회 세정한다.
참고자료 참고자료 없음
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생명과학, 혼성화, Hybridizayion, DNA

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