가. PCR이란?
나.PCR의 원리
다. PCR의 용도
라. PCR의 방법
PCR 반응 시약
본문내용
PCR 방법과 응용분야
가. PCR이란?
PCR(Polymerase Chain Reaction)은 DNA의 특정한 부분을 개시물질과 내열성 DNA 중합효소를 이용하여 수십만 배에서 백만 배까지 증폭하는 기술이다. 따라서 미량의 재료 중에서 목적하는 서열을 충분히 얻을수 있고 그 분석이나 클로닝도 가능한 기술이다.
나.PCR의 원리
이 방법은 DNA 중합효소 (DNA polymerase)의 연속적인 반응을 이용하여 단기간에 소량의 DNA를 대량으로 증폭하는 방법이다. DNA 중합효소는 한 가닥의 DNA를 주형으로 이용하여 이에 상보적인 서열을 가지는 DNA를 합성하는데 이 반응의 시작을 위하여 시발체라고 하는 작은 DNA조각이 필요하다. 따라서 적당한 시발체를 이용하면 목적하는 DNA 영역을 합성, 증폭할수 있다. 생체의 DNA는 두 가닥으로 되어 있으므로 분석하려는 DNA영역을 양 쪽 끝의 짧은 서열을 포함하는 2개의 시발체가 필요하다. 1회의 DNA 중합효소 반응으로 DNA가 2배로 되며 n회의 반응을 반복하면 이론적으로 2ⁿ분자수의 DNA를 증폭할수 있음이 PCR의 원리이다.
PCR법을 이용하면 검체 중이 분석하려는 DNA 영역을 수십만배로 증폭할수 있으므로 분석의 감도를 높일수 있으며, 극미량의 검체로 분석이 가능하다. PCR법의 감도는 매우 높아 1분자씩 DNA에서도 검출디 가능하며 실제로 정자 한 개 (DNA 1분자)에서 분석이 가능하다고 본다.
다. PCR의 용도
① 소량의 세포로부터 어떤 유전자의 존재 유무 검색
② 유전자의 결함, 돌연변이, 유전자 서열다양성 등의 검사
③ 유전자 클로닝
④ 유전자 발현 정도의 측정
라. PCR의 방법
PCR은 다음과 같은 재료를 사용하여 DNA를 증폭시키는 비교적 단순한 반응 과정이다. 아래와 같이 시료를 혼합한 후, 자동적으로 온도를 단 시간에 올렸다 내렸다 반복할 수 있는 장체에 넣고 20~40회 정도 반복한다.
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