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| 소개글 |
인간유방암세포인 MCF-7 세포주에서 카드뮴 및 비소의 독성유발 및 경감에 관한 연구를 한 논문으로 카드뮴과 비소가 인간유방암세포에서 어떠한 독성을 일으키며 어떠한 기작을 통하여 전달되는지 비교분석한 내용입니다. |
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| 목차 |
I. 서론 ........................................................1
1.1. 카드뮴 노출 및 독성 .......................................5
1.2. 비소 노출 및 독성 .........................................9
II. 실험 재료 및 방법 ..........................................13
2.1. 실험재료 및 처리 ..........................................13
2.2. 세포주 및 세포배양 ........................................13
2.3. 세포사멸과 독성확인 .......................................14
2.3.1. 세포 생존율(MTT assay) ..................................14
2.3.2. Apoptotic bodies 관찰(DAPI 염색) ........................15
2.3.3. Apoptotic cell deth 관찰(DNA fragmentation)..............15
2.3.4. 세포주기 관찰 및 발현 변화 ..............................16
(1) Flow cytometic analysis(FACS analysis)......................16
(2) 세포주기 발현 변화(Cell cycle expression ; Western analysis)17
2.4. 에스트로겐 수용체 경로를 통한 독성의 상관성 여부 확인 .....18
2.4.1. 중금속의 에스트로겐 활성 측정
: ERE-Luc reporter gene assa y..................................18
2.4.2. 에스트로겐 수용체 길항제의 카드뮴에 의한 ER 활성화 저해 확인19
2.4.3. 에스트로겐 수용체를 통한 독성 유발 규명
: ERα(-) 세포(MDA-MB-231)에 ERα 유전자 주입...................20
2.4.4. 중금속 독성유발이 단백질 발현에 미치는 영향..............21
2.4.5. 중금속 독성이 에스트로겐 수용체 함유 세포내 유전자 발현에 미치는
영향(cDNA microarray)...........................................22
2.5. 항산화제에 의한 중금속 독성 경감에 관한 연구...............23
2.5.1. 항산화제에 의한 세포 생존율(MTT assay)...................23
2.5.2. 항산화제에 의한 단백질 발현에 미치는 영향................23
2.6. 통계분석...................................................24
III. 결과.......................................................26
3.1. 세포사멸과 독성확인........................................26
3.2. 에스트로겐 수용체 경로를 통한 독성의 상관성 여부 확인......34
3.2.1. 중금속의 에스트로겐 활성 및 독성 유발 규명...............34
3.2.2. 중금속 독성유발이 단백질 발현에 미치는 영향..............38
3.2.3. 중금속 독성이 에스트로겐 수용체 함유 세포내 유전자 발현에 미치는
영향............................................................46
3.3. 항산화제에 의한 중금속 독성 경감에 관한 연구...............56
IV. 고찰........................................................63
참고문헌........................................................65
ABSTRACT........................................................73 |
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| 본문내용 |
카드뮴 및 비소는 다양한 세포와 장기에서 독성을 유발시킨다는 연구보고가 있으며,
인체와 동물에서 많은 독성연구가 진행 중에 있다. 그러나 카드뮴 및 비소에 대한
독성기전과 에스트로겐 수용체와의 상관성에 대해서는 아직까지 명확히 밝혀지지 않았다.
따라서 본 연구에서는 에스트로겐 수용체를 함유하는 세포인 MCF-7 세포를 이용하여
카드뮴 및 비소에 대한 독성영향 및 에스트로겐 수용체와의 상관성을 조사하고자 하였다.
카드뮴 및 비소에 대한 세포독성 평가를 위해 MCF-7 세포에 대한 IC 50 수치를 조사한
결과 카드뮴(55.54 μM)과 비소(123.02 μM)간의 차이를 나타냈으며, DAPI 염색, DNA
fragmentation 및 FACS 분석을 통해 세포사가 농도 의존적으로 증가 되는 것을
확인하였다. 카드뮴 및 비소 처리 시 ERE luciferase 활성을 측정한 결과 카드뮴이 50
μM 에서 에스트로겐 활성을 나타낸 것에 반하여, 비소의 경우는 활성을 나타내지 않았다.
카드뮴 및 비소에 의해 유도된 독성유발과 관련된 유전자 발현 변화를 조사한 결과 두
가지 중금속 모두에서 산화적 스트레스 작용 관련 유전자(heme oxygenase 1,
selenoprotein, thioredoxin 2, h eat shock protein, methllothione in) 발현이 공통적으로
증가하였다. 비교할만한 점은 비소를 처리한 경우에는 세포성장 및 신호전잘 관련
유전자(Insulin-like growth factor 1 receptor, WNT, ARNT, NFκB)가 증가하였다는
것이다.
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| 참고자료 |
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인간유방암세포인 MCF-7 세포주에서 카드뮴 및 비소의 독성유발 및 경감에 관한 연구
